购买问题
色谱柱使用及维护
产品指南
色谱知识
根据手性拆分原理,没有任何一种固定相可以针对各种类型的对映体进行分离。需要通过对固定相种类的筛选试验,选择适合拆分目的手性色谱柱或填料。
(1)根据参考文献方法报道,选择手性柱。
(2)将样品送到润奈泽实验室,我们将通过全面的筛选,确定适合分离该化合物的手性柱。
(3)可以通过电话等方式联系销售或技术支持咨询是否有合适的手性柱。
试用流程:
(1)提交手性柱申请表。
(2)我方评估,双方进行沟通。
(3)色谱柱快递包邮寄出,按试用方案进行试用,并同步反馈试用效果。
(4)按期寄回归手性柱。
采购色谱柱前,我们免费为您筛选手性色谱柱,初步找到一个符合送样目的分析方法。
润奈泽手性柱保存溶剂参见色谱柱说明书和检测报告,使用前使用该溶剂以0.5ml/min,冲洗约4小时。再更换为您的流动相,如您要使用的流动相与该保存溶剂如不兼容,则需要用合适的过渡溶剂对该柱进行过渡。
同时需特别注意这里确认仪器各管路中的溶剂体系是否适用于该柱,如不适合,在手性柱接上仪器前对仪器也进行正确的过渡。
正相手性柱中的溶剂是烷烃、醇等,水、乙腈、甲醇等溶剂直接进柱会损伤柱子。所以仪器当前的流动相体系如果是缓冲溶液和有机相等反相体系,在接柱子前必须对体系进行过渡。
在色谱柱接到色谱仪之前,必须用两通连接管路,依次用异丙醇、流动相等适宜的溶剂冲洗全部仪器管路;色谱泵的泵清洗溶液、自动进样器的灌注冲洗溶剂、针清洗溶剂(或洗针小瓶)也应更换成适宜溶剂,并置换原有通路中不适宜的溶剂。监测压强和检测器信号,在两者均稳定后,色谱柱方可以接入使用。
不同品牌仪器各模块单元具体过渡冲洗方法可咨询各品牌厂家技术人员。
涂敷型手性柱,填料和硅胶之间是以物理作用粘附在一起的,如使用强溶剂如含氯溶剂会破坏这种物理作用,将填料洗脱下来。所以丙酮、氯仿、氯仿、二氯甲烷、 N,N-二甲基甲酰胺、 二甲基亚砜、1,4-二氧六环、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯),即使存在微量,也会破坏手性固定相的结构,请不要用上述溶剂作为流动相组成部分,也不要用于溶解配制样品溶液。
与仪器或色谱柱中现有溶剂不互溶的溶剂也不能进行色谱柱,例如正相柱不能进水,反相柱不能进正己烷。
强碱性的添加剂或样品溶液不能进色谱柱,以免破坏色谱柱硅胶。本说明书未提及的溶剂或使用方法请在您使用前联系我们确认是否可以使用。
区别是固定相的种类不同,其手性识别专属性就不同。
(1)直链淀粉衍生物与纤维素衍生物之间的手性选择性有区别。
(2)直链淀粉(或纤维素)不同的衍生物之间手性选择性有区别。
(3)相同固定相,涂敷型和键合型之间的手性选择性有区别。
(4)不同色谱模式之间之间的手性识别选择性有区别,例如正相与反相。
涂敷型正相柱不能使用水作流动相或用水溶解样品,否则会损伤填料。一些水溶性的样品或需要连接MS的分析测试,较适宜用相同填料的反相柱,比如A-2对应的反相柱是A-2R。反相柱的使用类似C18柱,但不完全相同,具体请见其使用说明。因为使用的溶剂体系不一样,所以在A-2上能分开的手性化合物不一定能在A-2R的反相流动相中分开,反之同理。
涂敷型是将填料以物理作用涂敷在硅胶表面,键合型是将填料通过化学键共价键合在硅胶表面,后者的作用力更牢固些。A-2和A-2C的衍生物都是直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯),但两者的选择性是不一样的,总结起来,涂敷型和键合型的区别有以下几点:①手性选择性不一样;②键合型使用的溶剂范围比涂敷型的大;③涂敷型手性柱,正反相是分开的(比如正相柱是A-2C,反相柱是A-2R),键合柱可通过一定的溶剂切换实现同支柱即可用于正相也可用于反相;
常见的C18液相色谱有反相和正相之分。如果固定相的极性小于流动相的极性,则称为反相色谱。如果固定相的极性大于流动相的极性,就称为正相色谱。在反相色谱中,极性大的物质先出峰,极性小的物质后出峰;正相则相反。
在手性分离方法中,通常把以正己烷、醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、四氢呋喃等有机溶剂为流动相的方法称为正相方法;把以水(中性、酸性或碱性)和有机溶剂共同作为流动相的方法称为反相方法;把以100%的醇或乙腈做流动相的方法称为极性模式。
基于Dalgliesh提出的“三点作用原理”,认为在对映体和固定相之间多种作用力的综合结果将使两个对映体与固定相之间形成非对映体络合物的稳定性有差异。差异性越大,实现分离的可能性越大。
这些作用力的种类有π-π作用、偶极-偶极作用、氢键作用及非手性作用(如空间效应)等作用力等。
(1)专属性:手性杂质峰与其它峰的分离度,通常应不小于1.5。
(2)灵敏度:与手性杂质的限度相适应,通常情况下,人用药品的原料药手性杂质限度为0.1%,即0.1%的手性杂质峰的信噪比应不小于10。
(3)精密度:限度浓度时,多次进样时手性杂质峰面积RSD通常应不小于3.0%。
(4)准确度:限度浓度时,手性杂质回收率通常应在90%-108%之间。
(5)线性:在限度浓度20%-200%范围内,手性杂质峰面积与浓度应成良好的线性关系。
(6)耐用性:耐用性系指在测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受程度,为所建立的方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时,就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻,则应在方法中写明,并注明可以接受变动的范围。液相色谱法中典型的变动因素有流动相的组成和pH值、不同品牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。
购买问题
色谱柱使用及维护
产品指南
色谱知识
根据手性拆分原理,没有任何一种固定相可以针对各种类型的对映体进行分离。需要通过对固定相种类的筛选试验,选择适合拆分目的手性色谱柱或填料。
(1)根据参考文献方法报道,选择手性柱。
(2)将样品送到润奈泽实验室,我们将通过全面的筛选,确定适合分离该化合物的手性柱。
(3)可以通过电话等方式联系销售或技术支持咨询是否有合适的手性柱。
试用流程:
(1)提交手性柱申请表。
(2)我方评估,双方进行沟通。
(3)色谱柱快递包邮寄出,按试用方案进行试用,并同步反馈试用效果。
(4)按期寄回归手性柱。
采购色谱柱前,我们免费为您筛选手性色谱柱,初步找到一个符合送样目的分析方法。
润奈泽手性柱保存溶剂参见色谱柱说明书和检测报告,使用前使用该溶剂以0.5ml/min,冲洗约4小时。再更换为您的流动相,如您要使用的流动相与该保存溶剂如不兼容,则需要用合适的过渡溶剂对该柱进行过渡。
同时需特别注意这里确认仪器各管路中的溶剂体系是否适用于该柱,如不适合,在手性柱接上仪器前对仪器也进行正确的过渡。
正相手性柱中的溶剂是烷烃、醇等,水、乙腈、甲醇等溶剂直接进柱会损伤柱子。所以仪器当前的流动相体系如果是缓冲溶液和有机相等反相体系,在接柱子前必须对体系进行过渡。
在色谱柱接到色谱仪之前,必须用两通连接管路,依次用异丙醇、流动相等适宜的溶剂冲洗全部仪器管路;色谱泵的泵清洗溶液、自动进样器的灌注冲洗溶剂、针清洗溶剂(或洗针小瓶)也应更换成适宜溶剂,并置换原有通路中不适宜的溶剂。监测压强和检测器信号,在两者均稳定后,色谱柱方可以接入使用。
不同品牌仪器各模块单元具体过渡冲洗方法可咨询各品牌厂家技术人员。
涂敷型手性柱,填料和硅胶之间是以物理作用粘附在一起的,如使用强溶剂如含氯溶剂会破坏这种物理作用,将填料洗脱下来。所以丙酮、氯仿、氯仿、二氯甲烷、 N,N-二甲基甲酰胺、 二甲基亚砜、1,4-二氧六环、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯),即使存在微量,也会破坏手性固定相的结构,请不要用上述溶剂作为流动相组成部分,也不要用于溶解配制样品溶液。
与仪器或色谱柱中现有溶剂不互溶的溶剂也不能进行色谱柱,例如正相柱不能进水,反相柱不能进正己烷。
强碱性的添加剂或样品溶液不能进色谱柱,以免破坏色谱柱硅胶。本说明书未提及的溶剂或使用方法请在您使用前联系我们确认是否可以使用。
区别是固定相的种类不同,其手性识别专属性就不同。
(1)直链淀粉衍生物与纤维素衍生物之间的手性选择性有区别。
(2)直链淀粉(或纤维素)不同的衍生物之间手性选择性有区别。
(3)相同固定相,涂敷型和键合型之间的手性选择性有区别。
(4)不同色谱模式之间之间的手性识别选择性有区别,例如正相与反相。
涂敷型正相柱不能使用水作流动相或用水溶解样品,否则会损伤填料。一些水溶性的样品或需要连接MS的分析测试,较适宜用相同填料的反相柱,比如A-2对应的反相柱是A-2R。反相柱的使用类似C18柱,但不完全相同,具体请见其使用说明。因为使用的溶剂体系不一样,所以在A-2上能分开的手性化合物不一定能在A-2R的反相流动相中分开,反之同理。
涂敷型是将填料以物理作用涂敷在硅胶表面,键合型是将填料通过化学键共价键合在硅胶表面,后者的作用力更牢固些。A-2和A-2C的衍生物都是直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯),但两者的选择性是不一样的,总结起来,涂敷型和键合型的区别有以下几点:①手性选择性不一样;②键合型使用的溶剂范围比涂敷型的大;③涂敷型手性柱,正反相是分开的(比如正相柱是A-2C,反相柱是A-2R),键合柱可通过一定的溶剂切换实现同支柱即可用于正相也可用于反相;
常见的C18液相色谱有反相和正相之分。如果固定相的极性小于流动相的极性,则称为反相色谱。如果固定相的极性大于流动相的极性,就称为正相色谱。在反相色谱中,极性大的物质先出峰,极性小的物质后出峰;正相则相反。
在手性分离方法中,通常把以正己烷、醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、四氢呋喃等有机溶剂为流动相的方法称为正相方法;把以水(中性、酸性或碱性)和有机溶剂共同作为流动相的方法称为反相方法;把以100%的醇或乙腈做流动相的方法称为极性模式。
基于Dalgliesh提出的“三点作用原理”,认为在对映体和固定相之间多种作用力的综合结果将使两个对映体与固定相之间形成非对映体络合物的稳定性有差异。差异性越大,实现分离的可能性越大。
这些作用力的种类有π-π作用、偶极-偶极作用、氢键作用及非手性作用(如空间效应)等作用力等。
(1)专属性:手性杂质峰与其它峰的分离度,通常应不小于1.5。
(2)灵敏度:与手性杂质的限度相适应,通常情况下,人用药品的原料药手性杂质限度为0.1%,即0.1%的手性杂质峰的信噪比应不小于10。
(3)精密度:限度浓度时,多次进样时手性杂质峰面积RSD通常应不小于3.0%。
(4)准确度:限度浓度时,手性杂质回收率通常应在90%-108%之间。
(5)线性:在限度浓度20%-200%范围内,手性杂质峰面积与浓度应成良好的线性关系。
(6)耐用性:耐用性系指在测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受程度,为所建立的方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时,就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻,则应在方法中写明,并注明可以接受变动的范围。液相色谱法中典型的变动因素有流动相的组成和pH值、不同品牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。